产品货号：
YTB4031
中文名称：
T5核酸外切酶
英文名称：
T5 Exonuclease
产品规格：
1KU|5KU|20KU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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T5核酸外切酶是一种按照5'→3'方向降解双链或单链DNA的核酸外切酶。T5核酸外切酶既能从单链或双链DNA 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化。T5核酸外切酶无法降解超螺旋双链DNA，并且其降解单链DNA的活性可以通过将反应缓冲液中的Mg2+降低到低于1mM而进行抑制。基于以上特性，T5核酸外切酶常被用于Gibson组装(Gibson Assembly)。
Gibson组装是在恒温条件下，有效连接带有多个重叠序列片段的技术，其基本原理可以概括为三步：
产品组成：
保存条件：-20℃保存，三年有效。
10X Reaction Buffer：
200mM Tris-acetate (pH7.9,25℃),500mM Potassium Acetate,100mM Magnesium Acetate,10mM DTT。
酶储存液：
50mM Tris-HCl (pH7.5,25℃),100mM NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1% (v/v)Triton X-100,50% (v/v) Glycerol。
产品来源：
纯化自表达T5噬菌体D15基因质粒的E.coli菌株。
活性定义：
One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of acid soluble deoxyribonucleotide from double-stranded DNA in 30minutes at 37℃ in a total reaction volume of 50μL.
质量控制：
不含T5核酸外切酶之外的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
失活抑制：
加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5核酸外切酶失活。
产品用途：
常用于Gibson组装；降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA；从连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物；降解线性和缺刻质粒DNA，以获得高纯度的超螺旋质粒DNA；去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA；提高小量抽提质粒cDNA文库的转染效率。
应用实例：
图1.本制品消化线性dsDNA的效果图。在50μL反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate pH7.9,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT)中，加入通过PCR扩增产生的1μg 646bp片段，以及图中指定量的本产品或N公司的T5核酸外切酶，37℃孵育10min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6×DNA Loading Buffer，然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与竞品相比，具有类似的降解双链线性DNA的效果。
图2.本制品消化线性ssDNA的效果图。在50μL反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate pH7.9,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT)中，加入人工合成的1μg 59nt片段，以及图中指定量的本制品或N公司的T5核酸外切酶，37℃孵育30min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行7M Urea+15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳120min；之后用Redye溶液(货号：YTB0015)室温染色20min，即可拍照观察结果)。如图所示，本产品与竞品相比，具有类似的降解单链线性DNA的效果。
注意事项：
使用说明：
相关搜索：T5核酸外切酶，T5 Exonuclease
Gibson组装是在恒温条件下，有效连接带有多个重叠序列片段的技术，其基本原理可以概括为三步：
- T5核酸外切酶从DNA片段的5'末端开始消化，产生互补的单链3'末端(overhangs)，促使互补的末端退火；
- DNA聚合酶填补退火片段的缺口(gaps)；
- DNA连接酶将组装后的切刻(nicks)处进行连接，最后得到一个完整的双链DNA。
产品组成：
| 组分 | 1KU | 5KU | 20KU |
| T5核酸外切酶(10U/μl) | 100μL | 500μL | 2ml |
| 10X Reaction Buffer | 600μL | 2×1.5ml | 12ml |
保存条件：-20℃保存，三年有效。
10X Reaction Buffer：
200mM Tris-acetate (pH7.9,25℃),500mM Potassium Acetate,100mM Magnesium Acetate,10mM DTT。
酶储存液：
50mM Tris-HCl (pH7.5,25℃),100mM NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1% (v/v)Triton X-100,50% (v/v) Glycerol。
产品来源：
纯化自表达T5噬菌体D15基因质粒的E.coli菌株。
活性定义：
One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of acid soluble deoxyribonucleotide from double-stranded DNA in 30minutes at 37℃ in a total reaction volume of 50μL.
质量控制：
不含T5核酸外切酶之外的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
失活抑制：
加入EDTA至终浓度为至少11mM或含有SDS的DNA loading buffer (SDS的最终浓度为0.08%)可使T5核酸外切酶失活。
产品用途：
常用于Gibson组装；降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA；从连接的环状双链DNA中去除不完全连接产物；降解线性和缺刻质粒DNA，以获得高纯度的超螺旋质粒DNA；去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA；提高小量抽提质粒cDNA文库的转染效率。
应用实例：
图1.本制品消化线性dsDNA的效果图。在50μL反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate pH7.9,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT)中，加入通过PCR扩增产生的1μg 646bp片段，以及图中指定量的本产品或N公司的T5核酸外切酶，37℃孵育10min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6×DNA Loading Buffer，然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与竞品相比，具有类似的降解双链线性DNA的效果。
图2.本制品消化线性ssDNA的效果图。在50μL反应体系(50mM Potassium Acetate,20mM Tris-acetate pH7.9,10mM Magnesium Acetate,1mM DTT)中，加入人工合成的1μg 59nt片段，以及图中指定量的本制品或N公司的T5核酸外切酶，37℃孵育30min进行反应，反应完毕后立即置于冰浴，并加入1.2μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer，然后进行7M Urea+15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳120min；之后用Redye溶液(货号：YTB0015)室温染色20min，即可拍照观察结果)。如图所示，本产品与竞品相比，具有类似的降解单链线性DNA的效果。
注意事项：
- T5核酸外切酶是一种对于DNA底物有选择性的核酸外切酶，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，消化特定的底物时，须注意适当控制好酶量和反应时间。
- T5核酸外切酶的最佳反应温度为37℃，但是在50℃也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。
- T5核酸外切酶在普通PCR buffer中也具有活性。
使用说明：
- 参考下表在冰浴中设置反应体系：
成分 用量 终浓度 DNA xμl 0.02μg/μl Nuclease-free Water (44-x)μl - 10X Reaction buffer 5μL 1X T5核酸外切酶 1μL 0.2U/μl 总体积 50μL -
注：
① T5核酸外切酶应最后加入反应体系中，并且加入前须注意混匀反应体系；
② 使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。 - 适当混匀反应体系，低速离心以沉淀液体至管底。
- 反应条件：37℃孵育10-30min。
- 终止反应：反应结束后立即冰浴并加入EDTA至终浓度为11mM以终止反应。
- 将酶切消化后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳分析，拍照观察并分析酶切效果。如果需要从琼脂糖凝胶中回收DNA样品，推荐使用DNA凝胶回收试剂盒(货号：YT010)；如果需要从酶切消化反应体系中纯化DNA样品，推荐使用PCR纯化试剂盒(货号：YT009)。
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